单位

DNA操纵

1.DNA克隆

  • 限制自由(RF)
  • Transfer-PCR (TPCR)

2.DNA突变

  • 单点和多点突变
  • 删除和插入
  • 洗牌

蛋白表达

在合适的表达载体中克隆的目标基因被引入宿主细胞。为了增加某一特定蛋白质以可溶性、活性形式和高产形式表达的可能性,可以使用几种表达系统。其中包括细菌系统和三种真核系统,如酵母、昆虫和哺乳动物细胞。在4-10 ml培养基中进行小范围的表达筛选,并用SDS-PAGE分析可溶性和不溶性细胞组分的蛋白表达。一旦确定了最佳条件,就可以使用大规模培养(1-5L)来获得更多的蛋白质。

蛋白质纯化

蛋白质从各种不同的宿主通过商业和专门的色谱程序,利用各种冷冻的FPLC系统纯化。该单位在下列步骤提供协助:

  • 蛋白质结构设计及实验规划
  • 大规模文化的集中和缓冲交换
  • 蛋白质纯化
  • 删除标签
  • 蛋白质浓度和稳定性
  • 蛋白酶对蛋白质的处理
  • 重折叠的蛋白质
  • 蛋白质的特性

蛋白质结晶与结构测定

晶体学单元通过x射线晶体学为蛋白质结晶、结构测定和分析提供服务。
蛋白质结晶的目的是产生大到足以衍射x射线束的有序蛋白质单晶。寻找合适的结晶条件是一个冗长的试错过程,需要探索不同的沉淀剂,检查不同的结晶方法和不同的温度。一旦获得了合适的晶体,x射线数据就会在内部源或同步加速器设备中收集。数据处理后,蛋白质的三维结构被确定、细化,并使用不同的计算程序进行评估。我们对相关蛋白进行详细的基于序列的比较结构分析,并将蛋白结构与其功能、生化结果和生物学重要性关联起来。